96 اختبار أطقم اختبار ELISA لاستنساخ Kanamycin عالي الاستنساخ

طقم اختبار كاناميسين إليسا

وصف المنتج

REAGEN^™ مجموعة اختبار Kanamycin ELISA عبارة عن اختبار مناعي إنزيمي تنافسي للتحليل الكمي للكاناميسين في اللحوم / الكبد / الكلى ، محلول الخلية ، البول ، المصل والحليب.

الميزات الفريدة للمجموعة هي:

• طرق استخلاص عالية (> 80٪) وسريعة (10-40 دقيقة) وفعالة من حيث التكلفة.

• حد الكشف هو 0.2 نانوغرام / غرام.

• قابلية استنساخ عالية.

• فحص ELISA سريع (أقل من 1 ساعة بغض النظر عن عدد العينات).

نظرة عامة على الإجراء

تعتمد الطريقة على مقايسة ELISA اللونية التنافسية.تم طلاء Kanamycin-BSA في آبار الألواح.أثناء التحليل ، تمت إضافة العينة والجسم المضاد للكاناميسين (الجسم المضاد رقم 1) و HRP-Conjugate (الجسم المضاد المقترن HRP # 2) إلى الآبار للحضانة.إذا كانت بقايا كاناميسين موجودة في العينة ، فسوف تتنافس مع كاناميسين على آبار اللوحة لجسم كانامايسين المضاد ، ويستهدف الجسم المضاد الثانوي ، الموسوم بإنزيم البيروكسيداز ، الجسم المضاد الأولي المركب للدواء المطلي على صفيحة الآبار .كثافة اللون الناتجة ، بعد إضافة ركيزة HRP (TMB) ، لها علاقة عكسية مع تركيز بقايا كانامايسين في العينة.

محتويات المجموعة والتخزين ومدة الصلاحية

REAGEN^™تمتلك مجموعة اختبار Kanamycin ELISA القدرة على 96 تحديدًا أو اختبارًا لـ 42 عينة في نسختين (بافتراض وجود 12 بئراً للمعايير).أعد أي ميكروويلات غير مستخدمة إلى كيس الرقائق وأعد ختمها بالمجفف الموجود في العبوة الأصلية.قم بتخزين المجموعة في 2-8 درجة مئوية *.مدة الصلاحية 12 شهرًا عند تخزين المجموعة بشكل صحيح.

إذا كنت لا تخطط لاستخدام المجموعة لأكثر من شهر ، فقم بتخزين Kanamycin Standard Stock و Kanamycin Antibody # 1 و HRP-Conjugated Antibody # 2 عند -20 درجة مئوية أو في الثلاجة.

الحساسية (حد الكشف)

خصوصية (تفاعلية متقاطعة)

المواد المطلوبة غير متوفرة مع المجموعة

• قارئ لوحة ميكروتيتر (450 نانومتر)

• خلاط الأنسجة (مثل Omni Tissue Master Homogenizer)

• خلاط Vortex (مثل خلاط Genie Vortex من VWR)

• 10 و 20 و 100 و 1000 ماصات uL

• ماصة متعددة القنوات: 50-300 ميكرولتر (اختياري)

المحاذير والإحتياطات

• تحتوي المعايير على كاناميسين.تعامل بعناية خاصة.
• لا تستخدم المجموعة بعد تاريخ انتهاء الصلاحية.
• لا تخلط الكواشف من مجموعات أو مجموعات مختلفة باستثناء المكونات التي تحتوي على نفس الجزء رقم في تواريخ انتهاء صلاحيتها.تعتبر الأجسام المضادة والألواح محددة بمجموعة متنوعة من الأغراض.
• حاول الحفاظ على درجة حرارة المختبر من 20 إلى 25 درجة مئوية (68 درجة - 77 درجة فهرنهايت).تجنب إجراء المقايسات تحت أو بالقرب من فتحات التهوية ، لأن ذلك قد يسبب التبريد المفرط والتدفئة و / أو التبخر.أيضًا ، لا تقم بإجراء فحوصات في ضوء الشمس المباشر ، حيث قد يتسبب ذلك في ارتفاع الحرارة والتبخر.يجب تجنب أسطح المقاعد الباردة عن طريق وضع عدة طبقات من المناشف الورقية أو بعض مواد العزل الأخرى تحت ألواح الفحص أثناء الحضانة.
• تأكد من أنك تستخدم الماء المقطر أو منزوع الأيونات فقط لأن جودة المياه مهمة جدًا.
• عندما عينات الماصات أو الكواشف في لوحة ميكروتيتر فارغة ، ضع أطراف الماصة في الزاوية السفلية من البئر ، مع الاتصال بالبلاستيك.
• يجب أن يتم توقيت حضانات لوحات الفحص بأكبر قدر ممكن من الدقة.كن متسقًا عند إضافة المعايير إلى لوحة الفحص.أضف معاييرك أولاً ثم العينات الخاصة بك.
• أضف المعايير إلى اللوحة فقط بالترتيب من التركيز المنخفض إلى التركيز العالي لأن هذا سيقلل من مخاطر المساس بالمنحنى القياسي.
• احرص دائمًا على تبريد الأطباق في أكياس محكمة الغلق مع مادة مجففة للحفاظ على ثباتها.امنع التكثيف من التكون على الألواح بالسماح لها بالتوازن مع درجة حرارة الغرفة (20-25 درجة مئوية / 68-77 درجة فهرنهايت) أثناء التواجد في العبوة.

تأكد من تخزين العينات بشكل صحيح.بشكل عام ، يجب تبريد العينات في درجة حرارة 2-4 درجة مئوية لمدة لا تزيد عن يوم إلى يومين.قم بتجميد العينات إلى درجة حرارة لا تقل عن 20 درجة مئوية إذا احتاجت إلى التخزين لفترة أطول.يمكن إذابة العينات المجمدة في درجة حرارة الغرفة (20-25 درجة مئوية / 68-77 درجة فهرنهايت) أو في الثلاجة قبل الاستخدام.

• تحضير 1 × عينة مخفف:امزج حجمًا واحدًا من 10 × عينة مخفف مع 9 أحجام من الماء المقطر.
• التحضير ل 1 ×عينة تحويلة.متعادل: امزج حجمًا واحدًا بحجم 10 × تحويلة عينة.عازلة مع 9 أحجام من الماء المقطر.

الخلية المحللة

• خذ 100 ميكرولتر من محلول الخلية ، أضف 900 ميكرولتر من 1 × عينة محلول مخفف ، واخلط جيدًا.

• جهاز طرد مركزي لمدة 5 دقائق عند 4000 x g.

• خذ 50 ماي من المادة طافية لكل بئر للمقايسة.

ملحوظة: عامل التخفيف: 10.

جمبري / سمك / لحم / كبدة / كلى

• إلى 1.0 جم من العينة المتجانسة ، أضف 4.0 مل من 1 × نموذج تحويلة.متعادل ،

• دوامة العينة لمدة 1 دقيقة مع خلاط دوامة.

• الطرد المركزي للعينة لمدة 5 دقائق عند 4000 x g.

• انقل بعناية 200 ميكرولتر من الطبقة العليا إلى أنبوب جديدو أضف 1.375 مل من 1X عينة مخفف و 25 ميكرو لتر من عينة التوازن المؤقت ، دوامة لمدة 30 ثانية.

• استخدم 50uL لكل بئر للمقايسة.

ملحوظة: عامل التخفيف: 40.

البول / المصل

• خذ 50 ميكرولتر من عينة البول أو المصل ، أضف 1.2 مل من 1X عينة مخفف ، واخلط جيدًا.

• جهاز طرد مركزي لمدة 5 دقائق عند 4000 x g.

• خذ 50uL من المادة طافية لكل بئر للمقايسة.

ملحوظة: عامل التخفيف: 25.

حليب

• أضف 100 لتر من عينة الحليب في أنبوب الطرد المركزي ، أضف 900 ميكرولتر من 1X عينة مخفف.
• دوامة بقوة لمدة 30 ثانية.
• جهاز طرد مركزي عند 4000 x ج لمدة 10 دقائق.
• استخدم 50uL من العينة طافية للمقايسة.

ملحوظة: عامل التخفيف: 10

KANAMYCIN ELISA TEST KIT PROTOCOL

تحضير الكاشف

هام: يجب إحضار جميع الكواشف إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام (1 - 2 ساعة في 20 - 25°ج / 68 - 77°F)؛تأكد من قراءة قسم "التحذيرات والاحتياطات" الصفحة 3. يجب إعداد الحلول قبل اختبار ELISA مباشرة.يجب خلط جميع الكواشف بقلبها أو تدويرها برفق قبل استخدامها.قم بإعداد الأحجام اللازمة لعدد الآبار التي يتم تشغيلها.لا تعيد الكواشف إلى أنابيب / زجاجات المخزون الأصلية.يمكن أن يقلل استخدام الخزانات التي تستخدم لمرة واحدة عند التعامل مع الكواشف من مخاطر التلوث ويوصى به.

• تحضير محلول غسيل 1X

امزج حجمًا واحدًا من محلول الغسيل 20X مع 19 حجمًا من الماء المقطر.

بروتوكول اختبار ELISA

قم بتسمية الشرائط الفردية التي سيتم استخدامها وكواشف الكواشف على النحو التالي:

• أضف 50 ميكروليتر من كل معايير كانامايسين في نسختين إلى آبار مختلفة (أضف المعايير إلى اللوحة فقط بالترتيب من التركيز المنخفض إلى التركيز العالي).

• إضافة 50 ماي من كل عينة في نسختين إلى آبار عينة مختلفة.

• أضف 50 ميكرولتر من أب # 2 المترافق مع HRP لكل بئر و 50 ميكروليتر من جسم كاناميسين المضاد رقم 1 لكل بئر.تخلط جيدًا عن طريق هز اللوحة يدويًا برفق لمدة 30 ثانية.

• احتضان اللوحة لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة (20-25 درجة مئوية / 68-77 درجة فهرنهايت).(تجنب أشعة الشمس المباشرة وأغطية المقاعد الباردة أثناء الحضانة.يوصى بتغطية لوحة microtiter أثناء الحضانة).

• اغسل اللوحة 4 مرات بـ 250 ميكرو لتر من محلول غسيل واحد.بعد الغسل الأخير ، اقلب اللوحة واضغط برفق على اللوحة لتجف على المناشف الورقية (نفذ الخطوة التالية فورًا بعد غسل اللوحة. لا تدع اللوح يجف في الهواء بين خطوات العمل).

• أضف 100 ميكرولتر من ركيزة TMB.توقيت التفاعل مباشرة بعد إضافة الركيزة.امزج المحلول عن طريق هز اللوحة يدويًا برفق لمدة 30 ثانية أثناء الحضانة (لا تعيد أي ركيزة إلى الحاوية الأصلية لتجنب أي تلوث محتمل.أي محلول الركيزة الذي يظهر عليه اللون يدل على التدهور ويجب التخلص منه.يوصى بتغطية لوحة microtiter أثناء الحضانة).

• بعد الحضانة لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة (20 - 25°ج / 68 - 77°F) ، أضف 100 ميكرولتر من Stop Buffer لإيقاف تفاعل الإنزيم.

• اقرأ اللوحة في أسرع وقت ممكن بعد إضافة Stop Buffer على قارئ لوحة بطول موجي 450 نانومتر (قبل القراءة ، استخدم ممسحة خالية من النسالة أسفل اللوحة لضمان عدم تداخل الرطوبة أو بصمات الأصابع مع القراءات).

حسابات تركيز كاناميسين

يمكن بناء منحنى قياسي عن طريق رسم متوسط ​​الامتصاص النسبي (٪) الذي تم الحصول عليه من كل معيار مرجعي مقابل تركيزه في نانوغرام / مل على منحنى لوغاريتمي.

الامتصاص النسبي (٪) = معيار الامتصاصية صفرأو عينة × 100

استخدم متوسط ​​قيم الامتصاصية النسبية لكل عينة لتحديد التركيز المقابل للعقار المختبَر بوحدة نانوغرام / مل من المنحنى القياسي.

الشكل التالي هو منحنى قياسي للكلورامفينيكول.